中国株丙型肝炎病毒(HCV)感染猕猴后5^NTR-C区基因组的cDNA序列分析

从2份受丙型肝炎病毒(HCV)感染的献血员血清(CX1、CX2)、第一代感染HCV猕猴血清(CX3)、第二代感染HCV猕猴血清(CX4)中提取RNA, 用自行设计的HCV 5^非编码区和核心区C5^NTR-C区引物进行逆转录PCR, 经扩增克隆并序列分析, 结果显示: CX1 cDNA全长779bp, CX2 cDNA 778bp, CX3 cDNA 776bp, CX4 cDNA 777bp。CX1株和CX4株均在5^NTR nt-216有一C的插入, CX3和CX4区nt385-387处的3个碱基缺失; CX1株与CX2、CX3、CX4比较同源性分别为98.07%、96.15%、95.25%; CX2与CX3、CX4的同源性分别为96.28%、95.76%; CX3与CX4的同源性为97.56%。

丙型肝炎病毒(HCV)株的全基因组序列测定: 完成HCV 基因型6 全套17 个亚型基因组的测序

丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）的全基因组序列测定，曾经由于许多方面 的条件限制而难于完成。但是，其对于研究HCV 分子病毒学、流行病学、进化和致 病性却至关重要，特别是在临床应用中，不同序列的基因型决定α-干扰素治疗的不同 效果。在本研究完成之前，HCV 基因型6 仅有6 个亚型有其全基因组序列。因此， 本研究的主要目的在于，测定HCV 变异株代表基因型6 其余的11 个亚型和新亚型的 全基因组序列，并深入分析。 本研究从样品分别来自于中国、泰国，和在美国及加拿大生活的东南亚国家移民 的HCV 感染者。因为样品有限，改良传统的PCR 方法，摸索出“桥”和“岛”DNA 全序列扩增法，从每例样品100μl 血清或从100μl 血清中获得的cDNA 中测定了13 个HCV 全基因组核苷酸序列。 以来源于Genbank 的已知基因型6 的七个全长序列为参考对所测定的13 个亚型 全序列进行共同分析显示，这些全基因组核苷酸的两两比较相似率变化范围为 71.9%--82.7%，著地， 这四对序列间的相同率高于标准定义的HCV 基因亚型之间的 范围值75%-80%。为了进一步理解和证实这些亚型间的遗传相似性，本研究还测定 了代表这4 对亚型的病毒原型株的全基因序列，结果显示了相同的核苷酸水平上的变 异范围，这为HCV 基因亚型的分类提供了新的认识，亦强调了全长序列对于分类的 重要性。 从系统发育方面的分析证实，本研究所测得的13 个分离株都属于基因型6。在系 统发育树上，每个病毒株代表一个独立的枝。并形成了高度分化的HCV 基因型6 分 枝，从而清楚显示，各亚型的独立分布。本研究至此完成了基因型6 中17 个亚型的 全序列测定，而km41 和gz52557 因缺乏其临床上和流行病学上的多个感染病例的证 实，而继续保留其亚型未命名状态。结合来源于Los Alamos HCV database 的基因型6 的已知部分序列的变异株进一步分析，发现各相近亚型变异株均来自东南亚或东南亚国家移民，这提示了这些HCV 的相同感染源。 为了探讨HCV 夫妻间传播的可能性，本研究还测定了来自于泰国的两位感染 HCV 的献血员及其感染HCV 的配偶。这4 个基因序列C-0044 和C-0046 之间核苷 酸相同率为98.1%，而C-0185 和 C-0192 之间为97.8%。文献研究感染HCV 的夫妇 间的部分亚基因序列的相同率为96.3%至100%，本研究结果与此范围相符，并第一 次用全基因组序列提示了HCV 在夫妻间传播的可能性。 本研究还测定了基因型6 的另一个变异株的全基因组序列：HK6554，香港的某患 者，与上文中的GX004 一起，均为静脉吸毒者，并共同感染了HCV 和HIV-1。分析 结果还表明了一种趋势，即是在中国南方，基因亚型6e 有从以前的地方性传播方式 转为现有的流行性传播方式。这种转变可能由于静脉吸毒感染HCV 的人群的网络传 播而加快。 综上，本研究用传统PCR、简并引物结合链特异引物的方法有效地测定了共21 个病毒株的全基因序列。该方法也可用于其它分子流行病学的研究，特别在测定珍贵 的病毒序列然而样品量又受限时。本研究所测定的全基因组序列代表HCV 中最古老、 分化最多、地方性传播、又可能动物源性的基因型6 的全套17 个亚型。这有助于进 一步理解HCV 基因亚型的分类意义、更准确评价HCV 的进化和起源，亦有助于发 现HCV 新的变异株和提高临床诊断、治疗，为将来HCV 的流行及公众健康的预测、 预防和疫苗的制备奠定了坚实的分子遗传学基础。

中国株丙型肝炎病毒实验感染3种猕猴的初步结果

选用无各型肝炎病毒感染、体质良好的6只食蟹猴、3只恒河猴和3只熊猴,按人感染HCV的主要途径——输血,经静脉输注含HCV的中国献血员血浆,观察临床一般指标,血清ALT,抗HCV各种抗体和HCV-RNA,肝组织普通病理,超微病理。从肝组织中找病毒颗粒及免疫组化查HCV NS3抗原,观察14周,结果9例猕猴出现不同程度的肝炎症状,12例血清ALT升高,2例出现黄疸;5例抗HCVC22 IgG抗体阳性,4例抗HCV E2-24 IgG抗体阳性,10例抗HCV C33c IgG抗体阳性,2例抗HCVNS4-40 IgG抗体阳性,11例抗HCV NS5-A IgG抗体阳性,无1例抗HCVNS5-B IgG抗体阳性;9例HCV-RNA阳性。6例肝活检或肝小部切除作肝组织普通光镜镜检,5例肝细胞气球样变,点状坏死及少许纤维组织增生。另一例相应损害较重,呈碎片坏死,界板破坏,纤维组织增生明显,汇管区炎性细胞浸润,超微病理除普通炎症所具有的特征外,以滑面内质网大量增生扩张为其主要特征,3例从内质网里看到约30nm的类病毒颗粒。免疫组化显示3只动物肝组织内HCVNS3抗原阳性,以膜型为主少量周边型及散在胞浆内分布,因此我们认为已...

Complete genomic sequences for hepatitis C virus subtypes 6e and 6g isolated from Chinese patients with injection drug use and HIV-1 co-infection

In one of our recent studies, two HCV genotype 6 variants were identified in patients from Hong Kong and Guangxi in southern China, with injection drug use and HIV-1 co-infection. We report the complete genomic sequences for these two variants: GX004 and

丙型肝炎病毒基因和蛋白结构研究进展

　估计全球约有117 亿人口感染丙型肝炎,是一种严重影 响人类健康的传染病。丙型肝炎的病原为丙型肝炎病毒 (Hepatitis C Virus ,HCV) 。1989 年Choo 等人首先获得HCV 基因组的cDNA 全序列,使HCV 成为病毒学史上第一个首先 通过基因克隆技术确认的病毒〔1 ,2〕。此后,HCV 的分子生物 学研究进展迅速。现将HCV 病毒分子结构的最新研究状况 做一综述。

High prevalence of HIV-1 and hepatitis C virus coinfection among injection drug users in the southeastern region of Yunnan, China

The southeastern region of Yunnan province is a key site for drug trafficking and HIV-1 infection spread from the west of Yunnan and Laos to southeastern China. To investigate the prevalence of HIV-1 infection and hepatitis C virus (HCV) coinfection among injection drug users (IDUs) in southeastern Yunnan, three cohorts of 285 addicts, including 242 IDUs and 43 oral drug users, living in the cities of Gejiu and Kaiyuan and the county of Yanshan were studied. HIV-1 and HCV infections were detected by enzyme-linked immunosorbent assay and/or polymerase chain reaction. Data on the age, sex, risk behavior, drug use history, employment, ethnic background, and marriage status were obtained by interview. The overall prevalence of HIV-1 infection was 71.9%. The rate of HCV coinfection among 138 HIV-1-infected IDUs was 99.3%. Most HIV-infected IDUs were 20 to 35 years old (86.7%) and were ethnic Han (75.9%), suggesting that the epidemic in Yunnan is no longer confined to non-Han ethnic minorities, HIV prevalence in female IDUs (81.2%) was significantly higher than in male IDUs (68.2%) (p <.05). The prevalence of HIV infection reached 68.4% after 1 year of injection drug use. Needle/syringe sharing is the major high risk factor for the spread of HIV-1 and HCV infections. Large-scale educational campaigns are urgently needed to reduce the spread of HIV and HCV infection in these regions.

离心力和滑翔距离对于高超声速巡航飞行性能的影响

高超声速巡航飞行器（HCV）是21世纪国际空天技术竞争的焦点。HCV的飞行性能可以用它的初始发射质量与广义有效载荷之比衡量，文献[1]通过对该性能的优化分析，给出了最佳巡航速度。本文进一步考虑了离心力和滑翔距离对于HCV飞行性能和最佳巡航速度的影响。在一定的飞行距离下，对HCV飞行性能影响最大的是巡航速度，其次是升阻比，再次是巡航发动机比冲。随着飞行距离的增加，由于离心力和滑翔距离的计入，基于火箭发动机的高超声速巡航飞行性能大幅提高，从近中程到远程均显著优于经典的最小能量弹道。吸气式冲压发动机尽管比冲大幅优于火箭发动机，但在巡航速度适用范围和飞行器升阻比方面，均不及后者。综合考虑，基于火箭发动机的HCV是现阶段非常有竞争力的选择。

时间分辨激光荧光光谱技术在免疫分析中的应用

本研究以时间分辨激发荧光光谱分析技术为基础,进行稀土离子标记的激光激发的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)研究.实验以自行合成的二乙三胺五醋酸酐(DTPAA)为双功能螯合剂.用Eu3+标记兔抗人(RAH)IgG抗体,依据解离增强原理(DELFIA),研究了Eu3+-β萘甲酰三氟丙酮(β-NTA)的荧光分辨体系,测定了荧光光谱和荧光寿命,建立了铕离子分析检出方法,其工作曲线范围为1×10-7～1×10-11 g·mL-1,检测限为1×10-13 g·mL-1,相对标准偏差为6.4%.结合TRFIA方法学研究,进行了人血清丙型肝炎病毒抗体(Anti-HCV)检测.并同酶联免疫法(ELISA)对比.取得TRFIA法阳性检测率明显高于ELISA法的结果.

Laser-time-resolved fluorescence spectroscopy in immunoassays

This paper described a laser-excited time-resolved fluoroimmunoassay set. It made lanthanide ion to couple the anhydrde of diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPAA) for labeling antibodies. The experiment used polystyrene tap coated with HCV antigen as the solid phase and a chelate of the rare earth metal europium as fluorescent label. A nitrogen laser beam was used to excite the Eu3+ chelates and after 60 ys delay time,the emission fluorescence was measured. Background fluorescence of short lifetimes caused by serum components and Raman scattering can be eliminated by set the delay rime. In the system condition, fluorescent spectra and fluorescent lifetimes of Eu3+ beta-naphthoyltrifluroacetone (NTA) chelates were measured. The fluorescent lifetime value is 650 mu s. The maximum emssion wavelength is 613 nm. The linear range of europium ion concentration is 1 x 10(-7)- 1 x 10(-11) g.mL(-1) and the detection limit is 1 x 10(-13) g.mL(-1). The relative standard deviation of determination ( n = 12) for samples at 0.01 ng.mL(-1) magnitude is 6.4%. Laser-TRFIA was also found to be suitable for diagnosis of HCV. The sensitvity and specificity were comparable to enzyme immunoassay. The result was obtained with laser-TRFIA for 29 human correlated well with enzyme immunoassay.

时间分辨激光荧光光谱技术在免疫分析中的应用

本研究以时间分辨激发荧光光谱分析技术为基础 ,进行稀土离子标记的激光激发的时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)研究。实验以自行合成的二乙三胺五醋酸酐 (DTPAA)为双功能螯合剂。用 Eu3+标记兔抗人 (RAH) Ig G抗体 ,依据解离增强原理 (DEL FIA) ,研究了 Eu3+ -β萘甲酰三氟丙酮 (β- NTA)的荧光分辨体系 ,测定了荧光光谱和荧光寿命 ,建立了铕离子分析检出方法 ,其工作曲线范围为 1× 10 - 7～ 1× 10 - 1 1g· m L- 1 ,检测限为 1× 10 - 1 3g· m L- 1 ,相对标准偏差为 6 .4%。结合 TRFIA方法学研究 ,进行了人血清丙型肝炎病毒抗体 (Anti- HCV)检测。并同酶联免疫法 (EL ISA)对比。取得 TRFIA法阳性检测率明显高于EL ISA法的结果。